一、细胞培养条件

细胞名称：人小胶质细胞HMC3

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议1:2传代

传代情况：2天换液

备注：请用无菌离心管收集液体培养基，以便进行对比培养；如效果不理想，建议直接购买环亚集团的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，培养至良好状态后，加入完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方案。使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，之后在超净台内进行严格的无菌操作。再将细胞瓶放置在37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。请在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片是售后重要依据，未提供照片默认收到状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基进行对比培养，换液后松动瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未超过80%汇合度，收集培养液至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超80%，可进行传代。具体步骤如下：

弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后观察细胞消化情况；若细胞大部分变圆并脱落，迅速将其返回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落后转移悬液至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
弃上清，沉淀细胞，然后加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱；如果要转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻，直至管内无结晶，再用75%的酒精擦拭管外壁。
将冻存管内细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
弃上清后，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
第二天更换新鲜完全培养基并继续培养。

四、注意事项

有些细胞附着不牢，运输过程中可能会发生细胞脱落，这属于正常现象。如脱落较多，请将所有培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清用于过渡培养；沉淀加入1-2ml胰蛋白酶，轻轻吹打后消化1-2分钟，再加入5ml完全培养基终止反应。随后进行离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬，按1:2比例分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶并放入37℃、5% CO2培养箱培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题，可重发的情况：

运输过程中细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等，符合重发条件。
收到产品后48小时内发现细胞污染，请提供真实实验结果，核实后将重发。
常温发货的细胞静置24小时或干冰冻存发货的细胞复苏后24小时未存活（需提供真实细胞状态照片），可重发。
细胞污染问题需在收到后24小时内反馈，如干冰冻存发货细胞复苏后24小时或常温发货细胞静置4小时且未开封，出现污染者，核实后重发。
若在收到后7天内发现细胞活性问题，请提供台盼蓝染色法鉴定结果，核实后重发；
收货当天及第2、3天请拍照保存，3天内未告知的视为产品合格。在4-7天内出现问题并提供前三天和发生问题时的照片，及相关操作步骤的，将由技术人员判定责任并重发。

2）细胞出现问题，不予重发的情况：

因客户造成的细胞污染不予重发。
因客户不正确操作导致的细胞状态不佳不予重发。
非本库推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不良不予重发。
细胞状态不佳，未提供前三天照片的不予重发。
细胞培养中经其他处理的情况不予重发。
收到后两天内未告知的问题不予重发。
其他情况视具体情况而定。